Efecto de la preparación espermática previo a la fertilización in vitro sobre la membrana plasmática y el ADN de semen bovino sexado

Daniel Ángel, Natalia Pérez, Andrés Pareja, Omar Camargo, Rodrigo Urrego

Resumen


La utilización de semen sexado en la producción bovina posee un sinnúmero de ventajas. La combinación de la producción in vitro de embriones (PIV) con semen sexado permite ser más eficiente en la utilización de este material de alto costo económico con respecto a la inseminación artifi cial, cuando se utiliza semen sexado disminuyen las tasas de fecundación in vitro (FIV) y desarrollo embrionario. El objetivo de este estudio es evaluar el efecto de la centrifugación sobre la membrana plasmática y el ADN de semen bovino sexado a través de la prueba del test hiposmótico (HOST) y el ensayo cometa,  respectivamente. Tres tratamientos fueron usados; 1) espermatozoides sin centrifugar 2) espermatozoides lavados y seleccionados mediante percoll, un método que utiliza la centrifugación y 3) control positivo, espermatozoides sometidos a estrés oxidativo con H2O2 a una concentración fi nal de 200 μM. Se observó que no hay diferencia (p mayor que 0.05) entre el tratamiento 1 y 2. Pero si se observa una diferencia (p menor que 0.05) entre el semen centrifugado y no centrifugado con respecto al control positivo. Igualmente sucede con la integridad del ADN. En conclusión, la técnica de preparación a través de percoll no altera la integridad de la membrana plasmática ni el ADN bajo ciertas condiciones, por lo que se sugiere la utilización de este protocolo para la preparación espermática previo a la fertilización in vitro al no tener efectos deletéreos sobre la membrana plasmática y el ADN. Sin embargo, se sugiere evaluar las tasas de clivaje y blastocistos producidos utilizando dicho protocolo.

Abstract

The use of sex-sorted semen in cattle production has many advantages. The use of in vitro embryo production (IVP) with sex-sorted semen allow a more effi cient use of this high economic cost material on artifi cial insemination, using sexed semen on in vitro fertilization (IVF) rates and embryonic development decreased. The objetive of this study is to evaluate the effect of centrifugation on the plasma membrane and DNA of bovine sex-sorted semen through hyposmotic test (HOST) and the comet assay, respectively. Three treatments were used: 1) sperm non centrifuged 2) sperm washed and selected by percoll, using centrifugation and 3) positive control, sperm subjected to oxidative stress with H2O2 to a fi nal concentration of 200 μM. It was noted that there is not difference (p greater than 0.05) between treatment 1 and 2. But there is difference (p less than 0.05) between semen centrifuged and non centrifuged respect to the positive control. Same applies to the integrity of DNA. In conclusion, Percoll does not alter the plasma membrane integrity or DNA under certain conditions, it is suggested the use of this protocol for sperm preparation prior to in vitro fertilization, because I has not deleterious effects on the plasma membrane and DNA. However, it is suggested to evaluate the cleavage and blastocyst produced rates using this protocol.

 


Palabras clave


Test hiposmótico; Ensayo comenta; Percoll

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